Tris(三羥甲基氨基甲烷)是生化實(shí)驗中最常使用的緩沖液,因為它有好的緩沖能力、毒性低、對生物反應(yīng)的干擾極低,而且純度很高。有超過磷酸鹽的趨勢,如在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中都已開始實(shí)驗TRIS緩沖液,很少再用磷酸鹽。在分子生物實(shí)驗中使用也很廣泛。
1、TRIS(三羥甲基氨基甲烷)的應(yīng)用
① 在電泳緩沖液中同甘氨酸構(gòu)成緩沖體系穩(wěn)定P值;
② 在凝膠中使用TRIS-HCL緩沖體系穩(wěn)定PH值;
③ 被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑;
④ TRIS緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)還可用于線蟲的中間纖維的形成;
⑤ 在TRIS***緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,可用于DNA的穩(wěn)定和儲存;
⑥ 將調(diào)節(jié)PH值的酸溶液換成乙酸,獲得“TAE緩沖液”,換成硼酸可獲得TBE緩沖液。這兩種溶液常用于核酸電泳實(shí)中。
2、使用TRIS(三羥甲基氨基甲烷)緩沖液的注意事項
① TRIS緩沖液的PH值容易受溫度的影響,所以在配置的過程中注意環(huán)境溫度;
② 緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,常配成pH值為6.8,7.4,8.0,8.8;
③ Tris在一定程度上與各種分子反應(yīng),包括RNA酶抑zhi劑,醛,酶,DNA以及常見金屬如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,可以和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑zhi作用;
④ 對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,需使用與Tris緩沖溶液具有兼容性的電極;
⑤ Tris不適用于二喹啉甲酸(BCA)測定;
⑥ 易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封;
⑦ 它可以和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑zhi作用;
⑧ 吸入,攝入,皮膚吸收可造成傷害,操作時需戴好手套和護(hù)目鏡。
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