HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）是一種氫離子緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2。我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。它是一種弱酸，在開(kāi)放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右，下面我們繼續(xù)看看HEPES在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

1.HEPES在低溫時(shí)可較好地保持酶的結(jié)構(gòu)和功能

HEPES緩沖液是一種弱酸，常作為有機(jī)化工中的兩性離子緩沖劑和醫(yī)藥中間體。該物質(zhì)的分解能力可隨溫度的升高而增強(qiáng)，隨溫度的降低而減弱，但與其他緩沖劑相比，它的分解常數(shù)隨溫度變化不大，這使HEPES緩沖液成為在低溫時(shí)可較好地保持酶的結(jié)構(gòu)和功能的緩沖劑。

2.HEPES PH值范疇有益于細(xì)胞培養(yǎng)

通常，大多數(shù)細(xì)胞的最佳培養(yǎng)環(huán)境是pH7.2-pH7.4，而Hepes的緩沖范圍剛好為pH6.8-pH8.2內(nèi)。這對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)是有益的，與其他緩沖劑相比，Hepes在維持細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值方面具有更高的穩(wěn)定性，這也是Hepes廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，蛋白質(zhì)純化和提取，免疫沉淀，細(xì)胞裂解，活細(xì)胞成像和其他生物/生化研究的原因。

3.HEPES有益于肺炎支原體培養(yǎng)

 HEPES 是常用細(xì)胞培養(yǎng)緩沖劑，使用終濃度一般為10～50 mmol/L，通常情況下培養(yǎng)液內(nèi)含20 mmol/L HEPES 即可起到緩沖作用，細(xì)胞培養(yǎng)常用濃度為10 mmol/L。HEPES 緩沖液在此過(guò)程中發(fā)揮了緩沖作用，且濃度越大緩沖效果越明顯。當(dāng)培養(yǎng)基 pH 在 6.8 左右時(shí)，培養(yǎng)的肺炎支原體進(jìn)入了對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期；培養(yǎng)基PH在 6.5～6.0之間，培養(yǎng)基中的肺炎支原體含量達(dá)到平臺(tái)期，菌量維持在很大水平。

4.大腸桿菌培養(yǎng)基中建議使用HEPES

大腸桿菌培養(yǎng)基中比較常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營(yíng)養(yǎng)，但卻在生理PH值條件下會(huì)降低緩沖能力。而HEPES是一種很強(qiáng)的Buffer，加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng)。Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培養(yǎng)基中。

培養(yǎng)細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)有很多，其中很重要的一步就是為細(xì)胞選擇適合的生長(zhǎng)環(huán)境，選擇高品質(zhì)的培養(yǎng)基，對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言，不僅可以確保您實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，更能節(jié)約寶貴的實(shí)驗(yàn)時(shí)間和精力。德晟生產(chǎn)的HEPES為白色晶體粉末，主含量≥99.50%，鐵離子≤5ppm，***鹽≤0.05%，重金屬殘留（Pb)≤10ppm。可提供試用樣品粉末，自行配置成溶液進(jìn)行檢測(cè)使用。